Mercurial > repos > drosofff > msp_sr_signature
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author | mvdbeek |
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--- a/signature.py Mon Feb 16 12:08:18 2015 +0100 +++ b/signature.py Sun Mar 29 11:58:31 2015 -0400 @@ -6,86 +6,117 @@ # <13: R code> # version 2.0.0 -import sys, subprocess, argparse +import sys +import subprocess +import argparse from smRtools import * -from collections import defaultdict # test whether it is required +from collections import defaultdict # test whether it is required + def Parser(): - the_parser = argparse.ArgumentParser() - the_parser.add_argument('--input', action="store", type=str, help="input alignment file") - the_parser.add_argument('--inputFormat', action="store", type=str, choices=["tabular", "bam", "sam"], help="format of alignment file (tabular/bam/sam)") - the_parser.add_argument('--minquery', type=int, help="Minimum readsize of query reads (nt) - must be an integer") - the_parser.add_argument('--maxquery', type=int, help="Maximum readsize of query reads (nt) - must be an integer") - the_parser.add_argument('--mintarget', type=int, help="Minimum readsize of target reads (nt) - must be an integer") - the_parser.add_argument('--maxtarget', type=int, help="Maximum readsize of target reads (nt) - must be an integer") - the_parser.add_argument('--minscope', type=int, help="Minimum overlap analyzed (nt) - must be an integer") - the_parser.add_argument('--maxscope', type=int, help="Maximum overlap analyzed (nt) - must be an integer") - the_parser.add_argument('--outputOverlapDataframe', action="store", type=str, help="Overlap dataframe") - the_parser.add_argument('--referenceGenome', action='store', help="path to the bowtie-indexed or fasta reference") - the_parser.add_argument('--extract_index', action='store_true', help="specify if the reference is an indexed Bowtie reference") - the_parser.add_argument('--graph', action='store', choices=["global", "lattice"], help="small RNA signature is computed either globally or by item (global-lattice)") - the_parser.add_argument('--rcode', type=str, help="R code to be passed to the python script") - args = the_parser.parse_args() - return args + the_parser = argparse.ArgumentParser() + the_parser.add_argument( + '--input', action="store", type=str, help="input alignment file") + the_parser.add_argument('--inputFormat', action="store", type=str, choices=[ + "tabular", "bam", "sam"], help="format of alignment file (tabular/bam/sam)") + the_parser.add_argument( + '--minquery', type=int, help="Minimum readsize of query reads (nt) - must be an integer") + the_parser.add_argument( + '--maxquery', type=int, help="Maximum readsize of query reads (nt) - must be an integer") + the_parser.add_argument( + '--mintarget', type=int, help="Minimum readsize of target reads (nt) - must be an integer") + the_parser.add_argument( + '--maxtarget', type=int, help="Maximum readsize of target reads (nt) - must be an integer") + the_parser.add_argument( + '--minscope', type=int, help="Minimum overlap analyzed (nt) - must be an integer") + the_parser.add_argument( + '--maxscope', type=int, help="Maximum overlap analyzed (nt) - must be an integer") + the_parser.add_argument( + '--outputOverlapDataframe', action="store", type=str, help="Overlap dataframe") + the_parser.add_argument('--referenceGenome', action='store', + help="path to the bowtie-indexed or fasta reference") + the_parser.add_argument('--extract_index', action='store_true', + help="specify if the reference is an indexed Bowtie reference") + the_parser.add_argument('--graph', action='store', choices=[ + "global", "lattice"], help="small RNA signature is computed either globally or by item (global-lattice)") + the_parser.add_argument( + '--rcode', type=str, help="R code to be passed to the python script") + args = the_parser.parse_args() + return args args = Parser() if args.extract_index: - GenomeFormat = "bowtieIndex" + GenomeFormat = "bowtieIndex" else: - GenomeFormat = "fastaSource" + GenomeFormat = "fastaSource" if args.inputFormat == "tabular": - Genome = HandleSmRNAwindows (args.input, args.inputFormat, args.referenceGenome, GenomeFormat) + Genome = HandleSmRNAwindows( + args.input, args.inputFormat, args.referenceGenome, GenomeFormat) elif args.inputFormat == "sam": - Genome = HandleSmRNAwindows (args.input, args.inputFormat, args.referenceGenome, GenomeFormat) + Genome = HandleSmRNAwindows( + args.input, args.inputFormat, args.referenceGenome, GenomeFormat) else: - Genome = HandleSmRNAwindows (args.input, args.inputFormat, args.referenceGenome, GenomeFormat) + Genome = HandleSmRNAwindows( + args.input, args.inputFormat, args.referenceGenome, GenomeFormat) # replace objDic by Genome.instanceDict or... objDic = Genome.instanceDict objDic = Genome.instanceDict args.maxscope += 1 -general_frequency_table = dict ([(i,0) for i in range(args.minscope, args.maxscope)]) -general_percent_table = dict ([(i,0) for i in range(args.minscope, args.maxscope)]) -OUT = open (args.outputOverlapDataframe, "w") +general_frequency_table = dict( + [(i, 0) for i in range(args.minscope, args.maxscope)]) +general_percent_table = dict( + [(i, 0) for i in range(args.minscope, args.maxscope)]) +OUT = open(args.outputOverlapDataframe, "w") if args.graph == "global": - ###### for normalized summing of local_percent_table(s) - readcount_dic = {} - Total_read_in_objDic = 0 - for item in objDic: - readcount_dic[item] = objDic[item].readcount(args.minquery, args.maxquery) - Total_read_in_objDic += readcount_dic[item] - ###### - for x in (objDic): - local_frequency_table = objDic[x].signature( args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope) ) - local_percent_table = objDic[x].hannon_signature( args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope) ) - try: - for overlap in local_frequency_table.keys(): - general_frequency_table[overlap] = general_frequency_table.get(overlap, 0) + local_frequency_table[overlap] - except: - pass - try: - for overlap in local_percent_table.keys(): - general_percent_table[overlap] = general_percent_table.get(overlap, 0) + (1./Total_read_in_objDic*readcount_dic[x]*local_percent_table[overlap]) - except: - pass - print >> OUT, "overlap\tnum of pairs\tprobability" - for classe in sorted(general_frequency_table): - print >> OUT, "%i\t%i\t%f" % (classe, general_frequency_table[classe], general_percent_table[classe]) + # for normalized summing of local_percent_table(s) + readcount_dic = {} + Total_read_in_objDic = 0 + for item in objDic: + readcount_dic[item] = objDic[item].readcount( + args.minquery, args.maxquery) + Total_read_in_objDic += readcount_dic[item] + ###### + for x in (objDic): + local_frequency_table = objDic[x].signature( + args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope)) + local_percent_table = objDic[x].hannon_signature( + args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope)) + try: + for overlap in local_frequency_table.keys(): + general_frequency_table[overlap] = general_frequency_table.get( + overlap, 0) + local_frequency_table[overlap] + except: + pass + try: + for overlap in local_percent_table.keys(): + general_percent_table[overlap] = general_percent_table.get( + overlap, 0) + (1. / Total_read_in_objDic * readcount_dic[x] * local_percent_table[overlap]) + except: + pass + print >> OUT, "overlap\tnum of pairs\tprobability" + for classe in sorted(general_frequency_table): + print >> OUT, "%i\t%i\t%f" % ( + classe, general_frequency_table[classe], general_percent_table[classe]) else: - print >> OUT, "overlap\tnum of pairs\tprobability\titem" - for x in (objDic): - local_frequency_table = objDic[x].signature( args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope) ) - local_percent_table = objDic[x].hannon_signature( args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope) ) - for classe in range(args.minscope, args.maxscope): - print >> OUT, "%i\t%i\t%f\t%s" % (classe, local_frequency_table[classe], local_percent_table[classe], x) + print >> OUT, "overlap\tnum of pairs\tprobability\titem" + for x in (objDic): + local_frequency_table = objDic[x].signature( + args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope)) + local_percent_table = objDic[x].hannon_signature( + args.minquery, args.maxquery, args.mintarget, args.maxtarget, range(args.minscope, args.maxscope)) + for classe in range(args.minscope, args.maxscope): + print >> OUT, "%i\t%i\t%f\t%s" % ( + classe, local_frequency_table[classe], local_percent_table[classe], x) OUT.close() -## Run the R script that is defined in the xml using the Rscript binary provided with R. -R_command="Rscript "+ args.rcode +# Run the R script that is defined in the xml using the Rscript binary +# provided with R. +R_command = "Rscript " + args.rcode process = subprocess.Popen(R_command.split())
--- a/signature.xml Mon Feb 16 12:08:18 2015 +0100 +++ b/signature.xml Sun Mar 29 11:58:31 2015 -0400 @@ -1,13 +1,15 @@ <tool id="signature" name="Small RNA Signatures" version="2.0.1"> - <description></description> - <requirements> - <requirement type="package" version="0.12.7">bowtie</requirement> - <requirement type="package" version="0.1.18">samtools</requirement> - <requirement type="package" version="0.7.7">pysam</requirement> - <requirement type="package" version="2.14">biocbasics</requirement> - <requirement type="package" version="3.0.3">R</requirement> - </requirements> - <command interpreter="python"> + <description /> + <requirements> + <requirement type="package" version="0.12.7">bowtie</requirement> + <requirement type="package" version="0.1.18">samtools</requirement> + <requirement type="package" version="0.7.7">pysam</requirement> + <requirement type="package" version="2.14">biocbasics</requirement> + <requirement type="package" version="3.0.3">R</requirement> + <requirement type="package" version="1.9">numpy</requirement> + <requirement type="package" version="0.14">scipy</requirement> + </requirements> + <command interpreter="python"> signature.py --input $refGenomeSource.input --inputFormat $refGenomeSource.input.ext @@ -28,37 +30,67 @@ --graph $graph_type --rcode $sigplotter </command> + <inputs> + <conditional name="refGenomeSource"> + <param help="Built-ins were indexed using default options" label="Will you select a reference genome from your history or use a built-in index?" name="genomeSource" type="select"> + <option value="indexed">Use a built-in index</option> + <option value="history">Use one from the history</option> + </param> + <when value="indexed"> + <param format="tabular,sam,bam" label="Compute signature from this bowtie standard output" name="input" type="data"> + <validator message="database not set for this bowtie output. Select the database(=genome used for matching) manually, or select a reference fasta from your history." metadata_column="0" metadata_name="dbkey" table_name="bowtie_indexes" type="dataset_metadata_in_data_table" /> + </param> + </when> + <when value="history"> + <param format="fasta" label="Select the fasta reference" name="ownFile" type="data" /> + <param format="tabular,sam,bam" label="Compute signature from this bowtie standard output" name="input" type="data" /> + </when> + </conditional> + <param help="'23' = 23 nucleotides" label="Min size of query small RNAs" name="minquery" size="3" type="integer" value="23" /> + <param help="'29' = 29 nucleotides" label="Max size of query small RNAs" name="maxquery" size="3" type="integer" value="29" /> + <param help="'23' = 23 nucleotides" label="Min size of target small RNAs" name="mintarget" size="3" type="integer" value="23" /> + <param help="'29' = 29 nucleotides" label="Max size of target small RNAs" name="maxtarget" size="3" type="integer" value="29" /> + <param help="'1' = 1 nucleotide overlap" label="Minimal relative overlap analyzed" name="minscope" size="3" type="integer" value="1" /> + <param help="'1' = 1 nucleotide overlap" label="Maximal relative overlap analyzed" name="maxscope" size="3" type="integer" value="26" /> + <param help="Signature can be computed globally or by item present in the alignment file" label="Graph type" name="graph_type" type="select"> + <option selected="True" value="global">Global</option> + <option value="lattice">Lattice</option> + </param> + </inputs> + <outputs> + <data format="tabular" label="signature data frame" name="output" /> + <data format="pdf" label="Overlap probabilities" name="output2" /> + </outputs> + <tests> + <test> + <param name="genomeSource" value="history" /> + <param ftype="fasta" name="ownFile" value="ensembl.fa" /> + <param ftype="bam" name="input" value="sr_bowtie.bam" /> + <param name="minquery" value="23" /> + <param name="maxquery" value="29" /> + <param name="mintarget" value="23" /> + <param name="maxtarget" value="29" /> + <param name="minscope" value="5" /> + <param name="maxscope" value="15" /> + <param name="graph_type" value="global" /> + <output file="signature.tab" ftype="tabular" name="output" /> + <output file="signature.pdf" ftype="pdf" name="output2" /> + </test> + </tests> + <help> - <inputs> - <conditional name="refGenomeSource"> - <param name="genomeSource" type="select" label="Will you select a reference genome from your history or use a built-in index?" help="Built-ins were indexed using default options"> - <option value="indexed">Use a built-in index</option> - <option value="history">Use one from the history</option> - </param> - <when value="indexed"> - <param name="input" type="data" format="tabular,sam,bam" label="Compute signature from this bowtie standard output"> - <validator type="dataset_metadata_in_data_table" table_name="bowtie_indexes" metadata_name="dbkey" metadata_column="0" message="database not set for this bowtie output. Select the database(=genome used for matching) manually, or select a reference fasta from your history."/> - </param> - </when> - <when value="history"> - <param name="ownFile" type="data" format="fasta" label="Select the fasta reference" /> - <param name="input" type="data" format="tabular,sam,bam" label="Compute signature from this bowtie standard output"/> - </when> - </conditional> <!-- refGenomeSource --> - <param name="minquery" type="integer" size="3" value="23" label="Min size of query small RNAs" help="'23' = 23 nucleotides"/> - <param name="maxquery" type="integer" size="3" value="29" label="Max size of query small RNAs" help="'29' = 29 nucleotides"/> - <param name="mintarget" type="integer" size="3" value="23" label="Min size of target small RNAs" help="'23' = 23 nucleotides"/> - <param name="maxtarget" type="integer" size="3" value="29" label="Max size of target small RNAs" help="'29' = 29 nucleotides"/> - <param name="minscope" type="integer" size="3" value="1" label="Minimal relative overlap analyzed" help="'1' = 1 nucleotide overlap"/> - <param name="maxscope" type="integer" size="3" value="26" label="Maximal relative overlap analyzed" help="'1' = 1 nucleotide overlap"/> - <param name="graph_type" type="select" label="Graph type" help="Signature can be computed globally or by item present in the alignment file"> - <option value="global" selected="True">Global</option> - <option value="lattice">Lattice</option> - </param> - </inputs> +**What it does** + +This tool computes the number of pairs by overlap classes (in nt) from a bowtie output file, the z-score calculated from these numbers of pairs, and the ping-pong signal as described in Brennecke et al (2009) Science. +The numerical options set the min and max size of both the query small rna class and the target small rna class. +Three type of signals are plotted in separate pdf files, the number of pairs founds, the z-score calculated from these numbers of pairs, and the ping-pong signal as described in Brennecke et al (2009) Science. - <configfiles> - <configfile name="sigplotter"> + </help> + <citations> + <citation type="doi">10.1007/978-1-4939-0931-5_12</citation> + </citations> + <configfiles> + <configfile name="sigplotter"> graph_type = "${graph_type}" globalgraph = function () { @@ -112,40 +144,5 @@ treillisgraph() } </configfile> - </configfiles> - - <outputs> - <data name="output" format="tabular" label = "signature data frame"/> - <data name="output2" format="pdf" label="Overlap probabilities"/> - </outputs> - - <help> - -**What it does** - -This tool computes the number of pairs by overlap classes (in nt) from a bowtie output file, the z-score calculated from these numbers of pairs, and the ping-pong signal as described in Brennecke et al (2009) Science. -The numerical options set the min and max size of both the query small rna class and the target small rna class -Three type of signals are plotted in separate pdf files, the number of pairs founds, the z-score calculated from these numbers of pairs, and the ping-pong signal as described in Brennecke et al (2009) Science. - - </help> - -<tests> - <test> - <param name="genomeSource" value="history" /> - <param name="ownFile" value ="ensembl.fa" ftype="fasta" /> - <param name="input" value="sr_bowtie.bam" ftype="bam" /> - <param name="minquery" value="23" /> - <param name="maxquery" value="29" /> - <param name="mintarget" value="23" /> - <param name="maxtarget" value="29" /> - <param name="minscope" value="5" /> - <param name="maxscope" value="15" /> - <param name="graph_type" value="global" /> - <output name="output" ftype="tabular" file="signature.tab"/> - <output name="output2" ftype="pdf" file="signature.pdf"/> - </test> -</tests> - - + </configfiles> </tool> -
--- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/ensembl.fa Sun Mar 29 11:58:31 2015 -0400 @@ -0,0 +1,10060 @@ +>FBgn0026065_Idefix +GTGACATATCCATAAGTCCCTAAGACTTAAGCATATGCCTACATACTAATACACTTACAA +CACATACACCCCAATACAACATACACTACTCCGGATGTACCCAACAGATACCAGATAAGA +ATAAGATTGTTATATGATCCTCGAGAATGGAAAAAACCCCAATTCTAGATAAGTCACCCA +CTGGTAGACTAAACATCCGTCCCCTAATTTAAACAATTCCTTGCTTAAGCCTCACCCCAT +CGTCACATTCCCACGTTCAAAGCTCGGAGCCGCAATCCCGAAAAACAAAAGTATCGATTT +CAATAAACAAATTATAAGAATCTAAGAGCACTTGTATCCAAGAGCAAATGCACTTGAATC +CAAGAGAAACGCAAAGCTTTTTCTCTTTACGATCAGAATCCTAAAGTCTAAAGTCCATAT +TAGAAAAGCTCGATACCGAGGCTTGAACGTCAACCAAATCAGAATAATTATCAGAGTTCA +GTTTGAGACCTAATTGTAAAAGGTTCGGTGTTCTTCTCAAATAAAAAGATTGTAATCATT +TAGTGAAATAAAAATTATATTTTTTTCACTTATAAATATTGCAAGTATTTAATTGGCGCA +GTCGGTTAGGATCCAATAAAATAAAAGAGTCCTTTTAGTACGGTACTGATCAACTGAAGG +ATATGCTATACGACTAGCTATCCAAGATCAGCGAATTAAAATAGTGATTCAAAAATATTT +TTTAATCCGCAAAAGAATCTACGTGAAAGTAGTATTCAAAATAAAATCCCGTGCGGTCGG +AAACAAAAATTAATTTAAATTTTTTAATTCCGAAACTTAAAACCAAGTTTAAAGAAAACT +TAAAATCAAGAAAACTTAAAACCAAGTTTAAAGAAAACTTAAAATCAAGAAAACTTAAAA +CCAAGTTTAAAGAAAACTTAAAATCAAGAAAACTTAAAACCAAGTTTAAAGAAAACTCAA +AATCAAGAAAACTTAAAGCCAAAATAAGCTAGAAAACTAAAAGACATCATGGCAGTCCCA +CAACTCTCAGAAACACACCTAAACCAACTGCTAAACCAAATCAAAGAATTAAACTACTAC +GATGGCGCACCTGGCAAATTATCTGGATTCGTCAACCAAGTGGAACAACTGCTCAGTTTA +TACCCAACACAGGAAGCAAGACAGGCACACGTCATATATGGAGCAGTGAAGCGGTTATTA +GTGGATTCAGCCTTAGAAGTCGTAACCCAGGAAAGAGCTAACACATGGCTGGACATGAAG +AAAGCACTGGCAATGGCATTCAAAGACCATAGACCTTATGTAACTCTCATCAGACAATTA +GAAGACATATCATACCCAGGAAGTATCTGTAAGTTTATAGAAAAATTAGAAACACAATAC +TGGATTATGTTCGATAAGTTAGAATTAGAAAGTGACCATGTTGATAAATCGAATTATACC +GAAATGTTAAACAAAACTGTTAAATCAGTAATAGATCGAAAACTGCCGGATAGAATTTAT +ATGTCTTTGGCACGTAAAGATATTGATACAATTTATAAATTAAAACAAGCATCAATGGAA +TTAGGCCTTTATGATGCTATTCCAGAAAATCACCGTTCTAATAGAACAGAAATGAATAAA +CGTAGGAACAGGGGAAACTATAATCAAAATAATAATCAAAAATATTACAATAATAGAAAT +CACAACTACAGTAATTATTATCCTAGCATGAATCAGAATCATAATACACAACCACCTCAG +AATCCGACTCAACCTATGACAAATCAAAACCAATATTCACCGCGTTTCATACCGAATAAT +CAAAGAGGGAATTATTATGCATTTAGACGAGACTTAACACAAGCTCAGCAGAACAACCCA +CTTAATAACACCCTTAACTTCCAACCTTCGACATCGAATAATATTAACAGACAAGGGCCA +GTAAAAAGACAACGCGAGAGTCAGAGTGACCAAAGCAGGATGGATGTAAATTTTCATCAA +GCTGCCTCGGACACTCAAATGATAGAGAAGGACATACAAGTCCCTATGTAAAAATAATTC +ATCATAATAAAAATTATAAGGGAATGATCGATACAGGATCATCAATTAACATCATAAGAG +AAAATTTTGAGAACTTAGAAGAAAAGGAAGAAAACCTAATAGTATACACTATTAAAGGAC +CAATAACACTAAAGAGAAGTATAATAATAAAACCTACTTCAGTATGTCCGTCTGCTCAAA +AATTCTACATTCACAAATTTTCTGATAACTATGATTTCTTGTTAGGTCGAAAGTATTTAG +AAGATACAAAAGCTAAAATAGATTATGCTAACGAAACAGTAACACTAGGCTCAAAAGTAT +TTAAGTTTCTCTATGAAGAAAAGAAGGGCGAGACCGCATCCAAATGCCTTGACCCACAAG +AAAAGAATGATTCCGCTCTAGTGGACAGAACCAAACCAAAAATGCAAAAGGTTAAGACCG +CACCTAAGTGCCTTAAACCAAAGCATCAACAGCAGAAGAAAGAGACCGCATTACCCAAAT +GCCTCATTTCAAATGTTGTTAAAGACACAGTGGACAATGATGTAACACATCTCGATCCCA +TGTCCGTTGACAACGATATAGTCAACTTCGCGATTAACAATGAGTTACGCGAATGTAACG +AGTATAGACTCGAACACTTAAATGCAGAGGAAGTTGAATGTTTAAAGAAGTTCCTATACG +AATATAGAGACATTCAGTACAAAGAGGGCGAAAATTTGACCTTCACCAGTACTATTAAAC +ATGTCATCCAGACTCAACACGAAGACCCAGTATACCGTAAACCCTACAAGTACCCTCAAA +GCGTTGACCAAGAAGTTAACAAACAAATTAAAGAAATGATAGAACAAGGGATTGTTCGCA +AATCGAAGTCCCCTTATTGTTCTCCTATTTGGGTGGTCCCCAAGAAGGCAGACGCCTCTG +GGAAACAAAAATTCAGGTTGGTAGTCGATTACAGGAACCTAAATGAGATAACTGTTAACG +ACAAATTTCCCATTCCCCGAATGGATGAGATATTGGACAAACTAGGTAGATGCCAATACT +TTACCACTATAGATCTAGCCAAGGGTTTTCACCAAATCCAAATGGATGAAAATTCTATTG +CAAAAACAGCTTTTTCAACTAAGCATGGGCATTATGAATATACTCGTATGCCCTTTGGTT +TAAAAAACGCTCCAGCTACTTTTCAGAGATGCATGAATAATCTTCTGGAAGATTTAATCT +ACAAAGACTGTTTAGTCTATTTAGACGATATTATTGTTTATTCCACTCCATTGGAAGAAC +ACATTTTATCCCTAAAGAAAGTCTTTGAAAAACTGAGAGACGCTAATTTAAAGTTGCAAC +TAGATAAATGTGAATTCATGAAGAAAGAAACTGAATTCCTAGGACACATCGTCACAACAA +ATGGCATCAAACCAAATCCAAATAAAACTAAAGCAATTACAAATTTTCCATTACCCAAGA +CACCTAAGCAAATAAAATCATTTTTGGGATTATGTGGATTCTATCGCAAGTTTATTCCTA +ACTTTGCCAAAATAGTTAAACCCATGACCCTCAAATTAAAGAAAGGTGCTATAATAGACA +CCAAATGTAAAGAATACATCGAATCATTTGAAAAATTAAAAGTTTTGATAACTTCAGACC 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